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CFDA, SE 細(xì)胞增殖示蹤熒光探針使用說(shuō)明書

發(fā)布時(shí)間:2017/11/16點(diǎn)擊次數(shù):1997

CFDA, SE 細(xì)胞增殖示蹤熒光探針

產(chǎn)品名稱

貨號(hào)

規(guī)格

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價(jià)格(元)

CFDA, SE 細(xì)胞增殖示蹤熒光探針

4100L1011

25mg

-20

1550

 

熒光標(biāo)記細(xì)胞已被廣泛證實(shí)可有效確定總細(xì)胞的數(shù)量和一個(gè)樣本中存在多少活細(xì)胞。流式細(xì)胞術(shù)結(jié)合熒光染色法是分析非均質(zhì)細(xì)胞種群的有力工具。非熒光性的FDA和它的衍生物分子進(jìn)入細(xì)胞后被胞內(nèi)無(wú)特異性的酯酶所水解產(chǎn)生熒光。這些熒光產(chǎn)物只能積聚在具有完整細(xì)胞膜的細(xì)胞中。因此,死細(xì)胞無(wú)完整細(xì)胞膜不能被染色。FDA及其類似物(如CDCFDA)精細(xì)的跨膜動(dòng)力學(xué)以及胞內(nèi)水解特點(diǎn)與細(xì)胞功能相關(guān),因此FDA標(biāo)記可以通過(guò)熒光顯微鏡或者流式細(xì)胞儀來(lái)檢測(cè)細(xì)胞。然而,因?yàn)镃FSE和它的熒光類似物與GFP或者FITC具有相同的激發(fā)光譜,因此CFSE和它的熒光類似物不能用于GFP轉(zhuǎn)染細(xì)胞或者FITC標(biāo)記抗體的應(yīng)用中。VFSE染料與CFSE功能相似,因?yàn)樗鼈兌及ッ盖懈詈桶贩磻?yīng)的SE基團(tuán)。VFSE染料能用于多色反應(yīng),因?yàn)閂FSE與CFSE和它的熒光類似物具有不一樣的激發(fā)和發(fā)射光譜, 因此可以用于GFP轉(zhuǎn)染細(xì)胞或者FITC標(biāo)記抗體的應(yīng)用中。

 

常用名

CDCFDA

中文名稱

活細(xì)胞熒光示蹤探針

英文名稱

5-(and-6)-Carboxy-2',7'-dichlorofluorescein diacetate, succinimidyl ester

CAS#

/

分子式

C29H19

分子量

626.35

純度

≥95%(HPLC)

Ex(nm)

504

Em(nm)

529

結(jié)構(gòu)式

  

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

運(yùn)輸與保存方法

常溫運(yùn)輸,-20℃干燥避光保存,保質(zhì)期24個(gè)月。避免反復(fù)多次凍融。

使用方法

1.保存液配制(5mM)

按需配制,如取DMSO 360μL,溶解1mg CDCFDA,超音波溶解,得到5mM 保存液;將其按40μL體積分裝于避光的無(wú)菌凍存管中,-20℃可保存2個(gè)月。

注意:CDCFDA遇水容易分解,所以在配置時(shí)候要用無(wú)水DMSO,配置后計(jì)算用量盡快使用,多余的立刻避光保存-20℃。DMSO是有機(jī)溶劑,對(duì)于蛋白質(zhì)會(huì)有損傷,所以在配置的時(shí)候DMSO用量越少越好;

2. 工作液配制

取5mM的CDCFDA稀釋液1 ul,加入1ml 10%FCS 的PBS稀釋。

3.染色

a.重懸細(xì)胞。用有5%FCS的PBS重懸細(xì)胞,細(xì)胞濃度一般為1x1x106/ml (體外實(shí)驗(yàn))或1x1x107/ml(轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn))。

b.染色。1ml DFSE工作液與1ml細(xì)胞懸液混合后37℃孵育5-10分鐘。期間輕輕混勻兩次(用手輕彈管壁,切忌吹打)。

c.終止染色。用*培養(yǎng)液洗滌3次并離心。一般在第2次洗滌后再孵育5分鐘后進(jìn)行第3次洗滌。冰冷的含10 %新生牛血清RPMI1640(先加入1ml混勻 ,然后續(xù)加入7ml), 輕輕混勻1min(用手輕彈,切忌吹打),1 500 r/ min 離心5 min。

d.流式細(xì)胞儀在FL1通道檢測(cè)。

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