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MH培養(yǎng)基的原理及用法
2022-10-20
MH培養(yǎng)基為MH瓊脂培養(yǎng)基，微生物中所指的MH是Mueller-Hinton的首字母縮寫(xiě)，指的是水解酪蛋白。所以MH培養(yǎng)基也成為水解酪蛋白培養(yǎng)基。常用作培養(yǎng)基原材料，提供細(xì)菌生長(zhǎng)所需的生長(zhǎng)因子。MH培養(yǎng)基的原理：牛肉粉和酸水解酪蛋白提供氮源、維生素和氨基酸；可溶性淀粉吸收有毒的代謝產(chǎn)物。MH培養(yǎng)基的成分：酸水解酪蛋白/酸水解酪素17.5g牛肉浸膏粉2g淀粉1.5g瓊脂12gMH培養(yǎng)基的用法：稱取本品21.0g,加熱溶解于1000ml?蒸餾水中,121℃高壓滅菌15分鐘,備用。...
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介紹幾種常見(jiàn)的細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法
2022-09-28
細(xì)胞轉(zhuǎn)染技術(shù)主要分為三大類：化學(xué)法、物理法及生物學(xué)法。但是沒(méi)有一種方法是放之四海而皆準(zhǔn)的，即沒(méi)有任何方法適用于所有細(xì)胞和所有實(shí)驗(yàn)。因而只有依據(jù)自己的實(shí)驗(yàn)要求選擇理想的方法，才能獲得漂亮的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。下面介紹幾種常見(jiàn)的細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法：1、DEAE-右旋糖苷法常言道：同性相斥，異性相吸。因而，當(dāng)帶正電的DEAE-右旋糖苷與核酸中帶負(fù)電的磷酸骨架相遇，妥妥的火花四射，而后會(huì)被細(xì)胞膜抱團(tuán)相擁并通過(guò)細(xì)胞內(nèi)吞作用迎客到家。該法可用于瞬時(shí)轉(zhuǎn)染，操作相對(duì)簡(jiǎn)單、結(jié)果可重復(fù)，但是對(duì)細(xì)胞有一定的毒副作...
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分析影響細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率的因素
2022-09-27
細(xì)胞轉(zhuǎn)染指的是將外源分子如DNA、RNA等導(dǎo)入到真核細(xì)胞內(nèi)部的技術(shù)。隨著基因和蛋白功能研究的深入，轉(zhuǎn)染已經(jīng)成為科研實(shí)驗(yàn)中常用的技術(shù)手段之一。對(duì)于細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)，轉(zhuǎn)染試劑、轉(zhuǎn)染方法、細(xì)胞狀態(tài)等都會(huì)影響到細(xì)胞轉(zhuǎn)染的效率，本文主要對(duì)影響細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率的8個(gè)因素做一介紹。1.轉(zhuǎn)染試劑瞬時(shí)轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染可以選擇不同的轉(zhuǎn)染試劑，轉(zhuǎn)染試劑的選擇又可以根據(jù)已經(jīng)發(fā)表的文獻(xiàn)，已經(jīng)有很多細(xì)胞株被成功轉(zhuǎn)染，通過(guò)文獻(xiàn)資料可以參考最適的轉(zhuǎn)染試劑，當(dāng)然也要根據(jù)不同的實(shí)驗(yàn)需求選擇。一般來(lái)說(shuō)轉(zhuǎn)染試劑的要求是低毒，...
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胎牛血清使用中的常見(jiàn)問(wèn)題解答
2022-09-19
1、如何儲(chǔ)存和解凍血清才不會(huì)使產(chǎn)品質(zhì)量受損?將血清從冷凍箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室溫下使之全融。但必須注意的是，融解過(guò)程中必須規(guī)則地?fù)u晃均勻。長(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)存在2-8℃時(shí)，血清中的各種蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可見(jiàn)的混濁。因此，推薦在-20℃以下儲(chǔ)存血清，并避免反復(fù)凍融。我們建議血清應(yīng)保存在-2O℃。若存放于4℃時(shí)，請(qǐng)勿超過(guò)一個(gè)月。若一次無(wú)法用完一瓶，建議無(wú)菌分裝血清至恰當(dāng)?shù)臏缇萜鲀?nèi)，再放回冷凍。2、血清中包含絮狀...
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提高細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率的方法有哪些？
2022-09-15
轉(zhuǎn)染是將外源性基因?qū)爰?xì)胞內(nèi)的一種專門技術(shù)。分為物理介導(dǎo)方法：電穿孔法、顯微注射和基因槍；化學(xué)介導(dǎo)方法：如經(jīng)典的磷酸鈣共沉淀法、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法、和多種陽(yáng)離子物質(zhì)介導(dǎo)的技術(shù)；生物介導(dǎo)方法：有較為原始的原生質(zhì)體轉(zhuǎn)染，和現(xiàn)在比較多見(jiàn)的各種病毒介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染技術(shù)。理想細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法，應(yīng)該具有轉(zhuǎn)染效率高、細(xì)胞毒性小等優(yōu)點(diǎn)。病毒介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染技術(shù)，是目前轉(zhuǎn)染效率較高的方法，同時(shí)具有細(xì)胞毒性很低的優(yōu)勢(shì)。但是病毒轉(zhuǎn)染方法的準(zhǔn)備程序復(fù)雜，常常對(duì)細(xì)胞類型有很強(qiáng)的選擇性，在一般實(shí)驗(yàn)室中很難普及。其它物理和化...
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介紹細(xì)胞凍存的主要步驟
2022-09-13
細(xì)胞凍存是細(xì)胞保存的主要方法之一。利用凍存技術(shù)將細(xì)胞置于-196℃液氮中低溫保存，可以使細(xì)胞暫時(shí)脫離生長(zhǎng)狀態(tài)而將其細(xì)胞特性保存起來(lái)，這樣在需要的時(shí)候再?gòu)?fù)蘇細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。而且適度地保存一定量的細(xì)胞，可以防止因正在培養(yǎng)的細(xì)胞被污染或其他意外事件而使細(xì)胞丟種，起到了細(xì)胞保種的作用。除此之外，還可以利用細(xì)胞凍存的形式來(lái)購(gòu)買、寄贈(zèng)、交換和運(yùn)送某些細(xì)胞。細(xì)胞凍存時(shí)向培養(yǎng)基中加入保護(hù)劑--終濃度5%．15%的甘油或二甲基亞砜(DMSO)，可使溶液冰點(diǎn)降低，加之在緩慢凍結(jié)條件下，細(xì)胞內(nèi)水分透...
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原代細(xì)胞轉(zhuǎn)染的實(shí)驗(yàn)操作要注意的事項(xiàng)
2022-09-06
原代細(xì)胞（primaryculturecell）是指從機(jī)體取出后立即培養(yǎng)的細(xì)胞。有人把培養(yǎng)的第1代細(xì)胞與傳10代以內(nèi)的細(xì)胞統(tǒng)稱為原代細(xì)胞培養(yǎng)。原代細(xì)胞不僅廣泛應(yīng)用于分子、細(xì)胞生物學(xué)和生物醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)研究，如蛋白質(zhì)組學(xué)、基因組學(xué)、細(xì)胞株（系）研究、DNA，RNA和遺傳學(xué)研究等，還可應(yīng)用于當(dāng)今熱門的生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)如藥物篩選、藥物代謝和毒理研究、癌癥藥物的研究等。細(xì)胞轉(zhuǎn)染是將外源性基因?qū)爰?xì)胞內(nèi)的一種專門技術(shù)。隨著基因與蛋白功能研究的深入，轉(zhuǎn)染目前已成為實(shí)驗(yàn)室工作中經(jīng)常涉及的基本方法。轉(zhuǎn)...
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選擇真核細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑要考慮哪些因素
2022-08-30
轉(zhuǎn)染是采用除病毒感染外的其他方法將核酸(DNA或RNA)人工導(dǎo)入細(xì)胞的過(guò)程。采用各種化學(xué)、生物學(xué)或物理方法導(dǎo)入外源性核酸會(huì)改變細(xì)胞的特性,從而實(shí)現(xiàn)細(xì)胞基因功能和蛋白質(zhì)表達(dá)研究。轉(zhuǎn)染后,導(dǎo)入的核酸可以瞬時(shí)性地存在于細(xì)胞內(nèi),只表達(dá)一段時(shí)間且不會(huì)復(fù)制,也可以穩(wěn)定地整合至受體基因組內(nèi),隨著宿主基因組的復(fù)制而復(fù)制,各種基因輸送系統(tǒng)采用的術(shù)語(yǔ)與該領(lǐng)域的技術(shù)進(jìn)展步調(diào)一致,并進(jìn)一步區(qū)分不同的方法和細(xì)胞類型。轉(zhuǎn)染技術(shù)作為一種分析工具，可將外源基因?qū)胝婧思?xì)胞，有助于機(jī)體表征遺傳、蛋白質(zhì)合成、細(xì)...
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