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影響細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率的因素有哪些？
2022-08-19
細(xì)胞轉(zhuǎn)染是指將外源分子如DNA，RNA等導(dǎo)入真核細(xì)胞的技術(shù)。隨著分子生物學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)研究的不斷發(fā)展，轉(zhuǎn)染已經(jīng)成為研究和控制真核細(xì)胞基因功能的常規(guī)工具。在研究基因功能、調(diào)控基因表達(dá)、突變分析和蛋白質(zhì)生產(chǎn)等生物學(xué)試驗(yàn)中，其應(yīng)用越來(lái)越廣泛。影響細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率的因素有哪些？1.轉(zhuǎn)染試劑的選擇不同細(xì)胞系轉(zhuǎn)染效率通常不同，但細(xì)胞系的選擇通常是根據(jù)實(shí)驗(yàn)的需要，因此在轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)前應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求和細(xì)胞特性選擇適合的轉(zhuǎn)染試劑。每種轉(zhuǎn)染試劑都會(huì)提供一些已經(jīng)成功轉(zhuǎn)染的細(xì)胞株列表和文獻(xiàn)，通過(guò)這些資料可選...
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核酸純化的方法及原理
2022-08-19
核酸抽提與純化是分子生物學(xué)試驗(yàn)的基礎(chǔ)，核酸純化方法是影響提取核酸質(zhì)量高低的最重要因素，也是下游分子生物學(xué)試驗(yàn)成敗的關(guān)鍵。核酸純化的方法及原理如下：一、PC抽提法PC抽提是去除蛋白質(zhì)有效的手段，但超過(guò)了該飽和度，裂解體系中的蛋白質(zhì)不會(huì)被一次去除，必須靠多次抽提，方可*去除。且每次抽提都會(huì)損失部分核酸。另外，體系太粘稠的壞處是，蛋白質(zhì)難以*去除，以及基因組DNA會(huì)斷裂得更厲害，所以要注意裂解液與樣品的比例。PC抽提的另外一個(gè)用途是，利用酸性酚可以部分去除DNA的特點(diǎn)，在RNA抽提...
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化學(xué)發(fā)光免疫分析包含免疫分析系統(tǒng)和化學(xué)發(fā)光分析系統(tǒng)
2022-07-22
在常溫下由化學(xué)反應(yīng)產(chǎn)生的光，產(chǎn)生電子能級(jí)處于激發(fā)態(tài)的物質(zhì)，后者通過(guò)躍遷釋放能量產(chǎn)生光子，從而導(dǎo)至的發(fā)光現(xiàn)象?；瘜W(xué)發(fā)光是一個(gè)多步驟的過(guò)程。學(xué)發(fā)光免疫分析(ChemiluminescenceImmunoassay，CLIA)誕生于1977年，是近十年來(lái)在世界范圍內(nèi)發(fā)展非常迅速的非放射性免疫分析，將高靈敏的化學(xué)發(fā)光技術(shù)與高特異性的免疫反應(yīng)結(jié)合起來(lái)建立的微量測(cè)定技術(shù)，因此該技術(shù)靈敏度高、線性范圍寬、應(yīng)用范圍廣。而且CLIA與放射免疫分析(RIA)、熒光免疫分析(IFA)及酶免疫分析(...
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PCR原理及反應(yīng)步驟
2022-07-21
PCR的原理：多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerasechainreaction)簡(jiǎn)稱PCR技術(shù)，是近30多年發(fā)展起來(lái)的一種體外擴(kuò)增特異性DNA片段的技術(shù)，可在數(shù)小時(shí)之內(nèi)對(duì)僅有幾個(gè)拷貝的基因放大千萬(wàn)倍。那么，PCR的原理是怎樣的呢？PCR技術(shù)實(shí)際上是在模板DNA、引物以及原料(四種脫氧核糖核苷酸)在適宜的反應(yīng)條件下，通過(guò)DNA聚合酶的酶促反應(yīng)完成DNA擴(kuò)增的過(guò)程。PCR技術(shù)的特異性取決于引物和模板DNA結(jié)合的特異性。PCR反應(yīng)分為三步：1)變性：通過(guò)加熱時(shí)DNA雙螺旋的氫鍵斷裂，...
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影響重組腸激酶活性的因素有哪些
2022-07-20
腸激酶(Enterokinase，EK，EC3.4.21.9)是一種異源二聚體形式存在于哺乳動(dòng)物十二指腸內(nèi)的絲氨酸蛋白酶。它能高效專一性的水解工程菌表達(dá)的融合蛋白（識(shí)別位點(diǎn)是Asp-Asp-Asp-Asp-Lys）釋放出目的蛋白，被廣泛用于生物工程制藥的開(kāi)發(fā)。牛腸激酶由一條結(jié)構(gòu)亞基（重鏈）和一條催化亞基（輕鏈）構(gòu)成，二者以二硫鍵結(jié)合。據(jù)報(bào)道，重組腸激酶輕鏈體外具有全酶的酶切特異性，同時(shí)對(duì)基因工程融合蛋白底物的酶切活性較提純的牛腸激酶明顯增強(qiáng)。天然腸激酶來(lái)源有限，且從動(dòng)物組織提...
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一圖讀懂細(xì)胞轉(zhuǎn)染那些事-part1
2022-06-30
簡(jiǎn)析各類細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法細(xì)胞轉(zhuǎn)染是指將外源分子如DNA，RNA等導(dǎo)入真核細(xì)胞的技術(shù)。定義隨著分子生物學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)研究的不斷發(fā)展，轉(zhuǎn)染已經(jīng)成為研究和控制真核細(xì)胞基因功能的常規(guī)工具。下文中將從多個(gè)維度，介紹細(xì)胞轉(zhuǎn)染的各類小知識(shí)。一、瞬時(shí)轉(zhuǎn)染與穩(wěn)定轉(zhuǎn)染哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)能促使在其內(nèi)表達(dá)的蛋?正確折疊并進(jìn)行復(fù)雜修飾，表達(dá)的蛋?更接近真實(shí)自然狀態(tài)，便于模擬真實(shí)細(xì)胞內(nèi)環(huán)境，進(jìn)行蛋白功能研究。把目的基因轉(zhuǎn)入哺乳動(dòng)物細(xì)胞，表達(dá)?產(chǎn)蛋?通常有兩種?式：瞬時(shí)轉(zhuǎn)染與穩(wěn)定轉(zhuǎn)染（構(gòu)建穩(wěn)定細(xì)胞系），如圖...
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RNA提取方法總結(jié)
2022-06-22
這篇文章主要講的是幾種常用的RNA提取方法。1、異硫氰酸胍氯化銫超速離心法原理：使用蛋白質(zhì)變性劑異硫氰酸胍有效抑制RNA酶的活性，經(jīng)過(guò)起始密度為1.78g/ml的氯化銫介質(zhì)，進(jìn)行密度梯度超速離心，RNA沉淀于管底，而DNA與蛋白質(zhì)在上清中。使用這種方法，不但能得到高質(zhì)量的RNA，而且能同時(shí)分離出細(xì)胞染色體DNA.本法對(duì)于冷凍時(shí)間長(zhǎng)、細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核不易分離的組織標(biāo)本以及富含RNA酶的組織細(xì)胞(如胰腺)的RNA提取尤其適合。此法提取的RNA的質(zhì)量好和成功率高，已成為提取哺乳動(dòng)物細(xì)...
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如何選擇核酸染料
2022-05-27
科研人員還在為如何選擇核酸染料而煩惱嗎？帶您認(rèn)識(shí)幾款優(yōu)秀的核酸染料一、李記GelRed,李記GelGreen——李記生物研發(fā)的兩款核酸染料。據(jù)不*統(tǒng)計(jì)，有強(qiáng)烈致癌、致畸作用的EB染料仍以90%的優(yōu)勢(shì)占據(jù)核酸染料使用量多，在眾多的EB替代染料中，名氣最大的要數(shù)Life公司的SYBR系列、美國(guó)Biotium公司的GelRed,GelReen染料，其他替代染料要么是EB,吖啶橙改名，要么是國(guó)內(nèi)不成熟的仿品，安全性毫無(wú)保障。Life公司的SYBRGreen,SYBRGoad,SYBR...
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